© 2003 Digitized by USU digital library 1
MASITTA TANJUNG, S.Si.,M.Si.
Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam
Program Studi Biologi
Universitas Sumatera Utara
I. PENDAHULUAN
Dalam era industrialisasi salah satu upaya terobosan dalam meningkatkan
produksi dan efisiensi usaha termasuk usaha pertanian. Saat ini telah
berkembang rekayasa genetika yang akan memberikan harapan bagi industri
pertemakan, baik yang berkaitan dengan masalah produksi, pakan maupun medis
veteriner. Potensi pengembangan dan penerapan bioteknologi peternakan
tersebut sangat besar termasuk
Dalam dasawarsa terakhir ini peranan bioteknologi semakin hari semakin
bertambah besar yaitu dalam menunjang kegiatan pengembangan. Cakupan
bioteknologi cukup luas, baik yang baru dalam tahap penelitian maupun yang
sudah dapat diaplikasikan. Pada umumnya diasosiasikan sebagai rekayasa
genetika (genetic enginnering) dan biologi molekuler.
Penelitian dan pengembangan hormon dan produksi biologi lainnya
diarahkan untuk diagnosa dini baik untuk penyakit maupun untuk kebuntingan.
Aplikasi lain adalah untuk memacu pertumbuhan yang lebih cepat. Selain hormon
ada 3 bagian biologi yang akan diteliti dan dikembangkan, yaitu metabolik
sekunder, biokonversi dan analisis genetika.
Aplikasi bioteknologi dibidang peternakan yang sedang digarap meliputi 3
bagian utama yaitu bioteknologi produksi, bioteknologi pakan dan bioteknologi
molekuler, meliputi :
1. Bioteknologi reproduksi, seperti: inseminasi buatan, transfer embrio dan
rekayasa genetika meliputi 19 jenis ternak/hewan yang perlu dikembangkan.
2. Bioteknologi pakan ternak yang terdiri dari bioteknologi pakan hijau dan
konsentrat.
3. Bioteknologi molekuler dibidang kesehatan hewan dan produksi bahan vaksin
dan bahan obat (anti biotik, probiotik, immunoregulator hormon).
Reproduksi dan pertumbuhan ternak dipengaruhi oleh hormon seperti
steroid maupun peptida. Dalam kemajuan, bidang rekayasa genetika sangat
dimungkinkan untuk mengisolasi gen target. Kloning gen target sangat dibantu
dengan adanya tehnik hibridisasi maupun amplikasi gen secara in vitro dengan
proses reaksi polimerase berantai (PCR). Untuk keperluan hibridisasi diperlukan
DNA pelacak (probe). Probe ini dapat berupa potongan gen yang mempunyai
aktivitas serupa atau dapat berupa oligunukleotida yang disintesa berdasarkan
informasi asam amino penyusun protein. Untuk teknik PCR diperlukan informasi
urutan asam nukleat yang mengapit gen target yang digunakan sebagai dasar
penyusun primer oligonukieotida dengan menggunakan DNA synthesizer.
Protein berperan dalam semua aktivitas kehidupan sebab protein terlibat
dalam setiap aspek kehidupan seperti katalis struktur, regulasi dan sebagainya
(Wiryosuhanto, dkk. 1993). Hormon yang juga mengandung protein, dan juga
akan berpengaruh pada pengaturan terhadap ekspresi gen, hal ini dapat
dipelajari pada beberapa jenis hewan, termasuk ayam hutan hijau (Gallus
varius).
Beberapa jenis ayam yang akan kita kenal sekarang ini berasal dari ayam
hutan sebagai nenek moyangnya. Sampai saat ini ayam hutan (species Gallus)
yang masih hidup ada 4 gallus, seperti Gallus varius (green jungle fowl), Gallus
gallus atau Gallus benkiva (red jungle fowl), Gallus lafayetti (ceylonese jungle
fowl) dan Gallus sonnerati (grey jungle fowl).
© 2003 Digitized by USU digital library 2
Gallus varius (green jungle fowl) yakni ayam hutan hijau yang masih
dapat dijumpai hidup di hutan-hutan pulau Jawa khususnya Jawa Tengah, Jawa
Timur, Pulau Madura, Bali dan Lombok,
Tanda-tanda khas pada Gallus ini adalah sebagai berikut:
- Warna buill yang jantan dilapisi oleh lapisan hijau pada permukaan atasnya.
Oleh karena itu disebut juga green jungle fowl, sedangkan betina berwarna
coklat kekuning-kuningan.
- Jengggernya satu buah (single cowb) bentuknya licin tidak bergerigi pada
permukaan atas. .
- Fialnya satu helai yang terletak antara kedua belah tulang rawan
- Bulu ekor utama sebanyak 16 helai.
- Bulu leher ayam jantan bulat dan pendek-pendek.
- Kokoknya kedengaran seperti cek-ci -crek atau tidak Dada yang berbeda
(Mufarid, 1997).
Beberapa tahun yang lalu harga seekor ayam hutan tidak sebanding
dengan usaha penangkapannya. Pekerjaan yang dahulu hanya iseng-iseng
sekarang lain menjadi semiprofesional sebagai akibatnya beberapa ayam hutan di
pulau Jawa populasinya menurun, selanjutnya ayam hutan yang sempat dijual di
pasar dan sampai ke tangan pembeli atau pemelihara, biasanya tidak akan
berumur panjang. Hanya beberapa hari ada di rumah, ayam hutan ketakutan
betelur, luka pada sayap dan kepala, tidak mau makan dan akhirnya mati
(Mufarid, 1997).
Untuk mengantisipasi hal tersebut diperlukan usaha pelestarian ayam
hutan, terutama ayam hutan hijau (Gallus varius), maka diperlukan pengkajian
yang mendalam untuk menelusuri kehidupannya. Dalam hal ini penulis mencoba
meninjau regulasi hormonal terhadap ekspresi gen ayam hutan hijau (Gallus
varius).
ll. REGULASI HORMON
Pengendalian, pengaturan clan koordinasi aktivitas gel, jaringan dan alat–
alat tubuh dilakukan oleh sistem saraf dan hormon. Meskipun fungsi saraf dan
hormon berbeda tetapi banyak kaitan yang terjadi antara sistem safar dan
hormon, misalnya ada beberapa kelenjar bersekresi hanya bila ada stimulus yang
terdapat di kelenjar seperti pada kelenjar adrenal bagian medula dan
neurohipofisa.
Baik vertebrata maupun invertebrata mempunyai jaringan khusus yang
mensekresikan zat pengatur yang langsung disalurkan ke dalam darah. Jaringan
khusus ini dikenal sebagai kelenjar endokrin, sedangkan zat pengatur yang
disekresikan di sebut hormon. Pada saat ini telah diketahui banyak hormon
bertindak sebagai messenger pertama yang merupakan seri dari messenger
berikutnya sehingga mengarah kepada adanya respon spesifik di gel target.
(Wulangi, 1989).
Sifat-sifat kimia hormon.
Hormon merupakan bahan kimia yang disekresikan ke dalam cairan tubuh
oleh satu sel atau sekelompok sel dan dapat mempengaruhi fisiologi sel-sel tubuh
lainnya. Sebahagian besar hormon disekresikan oleh kelenjar endokrin dan
selanjutnya ke dalam darah diangkut ke seluruh tubuh. Secara kimiawi hormon
dapat dibagi dalam 3 tipe dasar, Yaitu :
1. Hormon steroid; golongan ini merupakan struktur kimia yang mirip dengan
kolesterol dan sebagian besar tipe ini berasal dari kolesterol.
hormon steroid yang disekresikan oleh (a) korteks adrenal (kortisol
dan aldosteron), (b) ovarium (estrogen dan progesteron), (c) testis
(tertosteron) dan (d) plasenta (estrogen clan progesteron).
2. Derivat asam amino tirosin; ada 2 kelompok hormon yang merupakan derivat
asam amino tirosin yaitu tiroksi dan triiodotironin, merupakan bentuk
iodinisasi dari derivat tirosin, dan kedua hormon utama yang berasal dari
© 2003 Digitized by USU digital library 3
medula adrenal epenefrin dan norepinefrin, kedua-duanya merupakan
katekolamin yang berasal dari tirosin.
3. Protein atau peptida. Pada dasarnya semua hormon endokrin yang terpenting
dapat merupakan derivat protein, peptida atau derivat keduanya. Hormon
yang disekresikan kelenjar hipofisis anterior dapat merupakan molekul protein
atau polipeptida besar; hormon hipofisis posterior, hormon antidiuretik dan
oksitosisn merupakan peptida asam amino. Insulin, glukagon dan
parathormon merupakan polipeptida besar (Guyton, 1994).
Hormon yang disekresi oleh hipotalamus merupakan peptida-peptida
pendek yang mempunyai tiga sampai lima belas residu asam amino. Hormonhormon
ini dapat diisolasi dan diidentifikasi sesudah melalui penelitian selama
bertahun-tahun. Sebagai contoh 1 mg faktor hormon pelepas tirotropin yang
dapat diisolasi dari 4 ton jaringan yang mendapat hadiah nobel pada tahun 1977
(Lehninger, 1994).
Ada lima metode yang digunakan dalam studi hormon atas kelenjar
endokrin yaitu;
1. Ekstirpsasi kelenjar endokrin. Suatu alat tubuh dapat diidentifikasikan
mempunyai fungsi endokrin bila alat tubuh ini diambil atau di inaktifkan.
Misalnya dengan jalan diradiasi akan terjadi perubahan dalam struktur
maupun fungsinya, perubahan-perubahan akan hilang bila kita menyuntikan
hormon dari kelenjar yang normal atau bila kita menyuntikan hormon atau
translantasi dari jaringan kelenjar.
2. Metoda menyuntikan, dengan menyuntikan suatu hormon tertentu kita dapat
mengetahui pengaruhnya.
3. Metode klinik, dengan metode klinik dapat ditentukan hubungan tidak
berfungsinya tubuh dengan kelainan kelenjar.
4. Metode analitik, analisis perlu dilakukan untuk mengetahui ada atau tidak
adanya hormon dalam darah, urin, saliva dan cairan tubuh.
5. Metode perunut zat radioaktif digunakan untuk melokasikan dan mencari jejak
hormon di dalam tubuh (Wulangi, 1989).
Mekanisme kerja hormon
Hormon endokrin hampir tidak pernah bekerja secara langsung pada
sistem intra selluler untuk mengatur berbagai reaksi kimia dalam sel. Hormon
mula-mula berikatan dengan reseptor hormon yang terdapat di permukaan gel
atau di dalam gel. Ikatan hormon dan reseptor memulai timbulnya rangkaian
reaksi kimia di dalam gel. Setiap reseptor sangat spesifik untuk satu macam
hormon. Keadaan inilah yang menentukan macam hormon yang akan bekerja
pada suatu jaringan tertentu. Jaringan target yang berpengaruh adalah jaringan
yang mempunyai reseptor spesifik (Guyton, 1994).
Pada umumnya lokasi reseptor dari berbagai macam hormon adalah
sebagai berikut;
- Pada membran sel, reseptor pada membran sangat khusus untuk hormon
golongan protein, peptida dan katekolamin.
- Di dalam sitoplasma, reseptor untuk berbagai hormon steroid dapat dijumpai
hampir semuanya di dalam sitoplasma.
- Di dalam inti, reseptor untuk hormon metabolisme tiroid (tiroksin dan
triiodotironin), ditemukan didalam inti, diduga terletak dalam hubungan langsung
dengan satu atau lebih kromosom.
Jumlah reseptor di dalam suatu sel target tidak konstan, sebab reseptor
protein ini akan rusak sendiri atau dengan mekanisme pembentukan protein di
dalam sel dapat terbentuk reseptor baru. Hormon steroid dan tiroksin mengubah
fungsi sel dengan cara mengaktifkan gen, tetapi dengan mekanisme yang sedikit
berbeda Hormon steroid merupakan hormon yang larut dalam lemak, sehingga
dengan mudah dapat menembus membran sel menuju ke sel target. Setelah
masuk ke dalam sel, hormon steroid mengadakan ikatan dengan reseptor yang
ada dalam sitoplasma membentuk hormon reseptor kompleks. Selanjutnya
© 2003 Digitized by USU digital library 4
hormon reseptor kompleks di translokasikan ke dalam nukleus dan mengadakan
interaksi dengan gen yang khusus. Gen yang diaktifkan kemudian membentuk
enzim yang penting untuk mengubah fungsi sel.
III. EKSPRESI GEN
Gen adalah sepotong DNA yang menyandikan rantai polipeptida dan RNA.
Tidak semua gen diekspresikan secara tepat dalam bentuk rantai polipeptida.
Beberapa gen menyandikan beberapa jenis RNA tranfer dan gen lain menyandi
berbagai jenis RNA ribosomal. Gen yang menyandi polipeptida dan RNA dikenal
sebagai gen struktural. Gen ini menentukan struktur beberapa produk akhir gen,
seperti suatu enzim atau RNA yang stabil. DNA juga mengandung segmen atau
urutan lain yang hanya menjalankan fungsi pengaturan (regulasi). Beberapa
diantara segmen pengatur menyusun isyarat yang menunjukkan awal dan akhir
gen struktural, yang lain berpartisipasi dalam memulai atau mengakhiri proses
transkripsi gen struktural. Jadi kromosom mengandung gen struktural dan urutan
pengatur (Lehninger, 1994).
Semua gen harus diekspresikan agar berfungsi. Tahap pertama dalam
ekspresi adalah transkripsi gen menjadi untaian RNA yang komplementer. Untuk
beberapa gen yang mengkode molekul tRNA dan rRNA transkripsi itu sendiri
merupakan molekul yang penting secara fungsional.
Untuk gen-gen lain transkripsi ditranslasi menjadi molekul protein.
Potongan gen yang tidak terdapat pada transkripsi disebut intron. Disamping
intron, lokasi titik permulaan dan titik akhir transkripsi sangat penting
diperhatikan. Kebanyakan transkrip tidak hanya merupakan kopi gen tetapi juga
daerah nukleotid pada kedua sisinya. Signal atau isyarat menentukan permulaan
dan akhir proses transkrip. Signal terletak dalam urutan polinukleotid pendek
yang mengatur kerja enzim polimerase yang menstranskrip.
Gambar 1. Beberapa hal yang penting dalam ekspresi gen
Kebanyakan metode analisis transkrip didasarkan kepada hibridisasi
antara transkrip RNA dengan pragmen DNA yang rnengandung gen bersangkutan
Pada hibridisasi asam nukleat, hibridisasi antara untai DNA komplernenter dengan
untai RNA terjadi sama cepatnya dengan hibridisasi antara molekul DNA untai
© 2003 Digitized by USU digital library 5
tunggal Hasil hibrid DNA-RNA dapat dianalisis dengan mikroskop elektron atau
dengan nuklease yang spesifik.
Pengamatan molekul asam nukleat dengan ME
Biasanya molekul DNA dicampur dengan protein seperti sitokrom misalnya
sitokrom c yang akan mengikat polinukleotid dan membungkusnya dalam lapisan
yang tebal. Molekul yang terbungkus ini harus diwarnai dengan uranil asetat atau
bahan padat elektron lain (Gambar 2). Jika gen mengandung intro maka daerah
untai DNA tidak akan memiliki homologi dengan transkrip RNA, sehingga tidak
terjadi pasangan basa. Sebaliknya akan terbentuk pelengkungan keluar (loop
out) yang memberikan gambaran khas pada pengamatan mikroskop elektron
(Gambar 3). Jumlah dan posisi lengkung tersebut akan sesuai dengan jumlah dan
posisi intron dalam gen. Informasi selanjutnya akan diperoleh dengan melakukan
perunutan gen dan mencari gambaran khas yang menandai batas-batas intron.
Analisa hibrid DNA-RNA dengan menggunakan nuklease
Hibrid DNA-RNA melibatkan penggunaan nuklease spesifik untuk untai
tunggal seperti nuklease S 1, ensim ini memecah DNA atau RNA untai tunggal,
termasuk daerah untai tunggal pada ujung molekul yang terutama beruntai
ganda atau pada hibrid DNA-RNA. Jika molekul DNA yang mengandung gen
dihibridisasi dengan transkrip RNAnya dan kemudian diberi nuklease S 1, maka
daerah untai tunggal DNA non hibrid pada tiap ujung hibrid akan didigesti
bersama-sama dengan intron yang melengkung keluar (Gambar 4).
Gambar 2. Preparasi molekul DNA dengan pengamatan ME
Gambar 3. Gambaran hibrio DNA-RNA antara gen yang mengandung intron
Fragmen DNA untai tunggal yang terlindung dari digesti nuklease S 1
dapat diambil kembali jika untai RNA dipecahkan dengan penambahan alkali.
Cara yang digunakan untuk mernilih fragmen restriksi yang membatasi
gen yang ditunjukkan pada Gambar 5. Fragmen Sau 3A yang mengandung
daerah yang membentuk kode 100 bp, bersama dengan urutan leader yang
© 2003 Digitized by USU digital library 6
mendahului gen dengan panjang 300 bp, telah diklon ke dalam vektor M 13 dan
didapatkan sebagai molekul untai tunggal. Sampel transkrip RNA ditambahkan
dan dibiarkan untuk bergabung dengan molekul DNA. Molekul DNA masih akan
merupakan untai tunggal, tetapi sekarang memiliki daerah kecil yang dilindungi
oleh transkrip RNA, kecuali daerah yang terlindungi semua akan didigesti oleh
nuklease S 1 dan RNA dipecah dengan alkali sehingga meninggalkan sebuah
fragmen DNA untai tunggal pendek.
Jika manipulasi tersebut diamati dengan seksama maka akan menjadi
jelas bahwa ukuran fragmen untai tunggal ini sesuai dengan jarak antara titik
permulaan transkrip dengan tempat Sau 3A sebelah kanan, oleh karena itu
ukuran fragmen untai tunggal tersebut ditentukan dengan elektroforesis dan
informasi ini digunakan untuk menandai titik permulaan transkrip pada urutan
DNA (Brown, 1991).
Gambar 4. Pengaruh nukleas S1 pada hibrid DNA-RNA
Gambar 5. Menentukan titik permulaan transkripsi
© 2003 Digitized by USU digital library 7
Pada tahun terakhir ini telah dikembangkan tekhnik manipulasi RNA,
termasuk cara untuk menentukan urutan RNA. Proses ini memberikan gambaran
dalam pengaturan ekspresi gen. Mengidentifikasi dan mempelajari produk
translasi gen yang diklonkan. Dua tehnik yang berhubungan yaitu Hybrid-Release
Translation (HRT) dan Hybrid-Arrest Translation (HART) digunakan untuk
identifikasi produk translasi yang dikode oleh gen yang diklonkan. Keduanya
tergantung pada kemampuan mRNA mumi untuk mengarahkan sintesa protein
dalam sistem translasi bebas sel (cell-free translation systeme). Sistem tersebut
merupakan ekstrak sel yang biasanya dibuat dari benih gandum atau retikulosit
kelinci, keduanya sangat aktif dalam sintesis protein serta mengandung ribosom,
tRNA dan molekul lain yang diperlukan untuk sintesa protein sampel mRNA
ditambahkan pada sistem translasi bebas sel bersama-sama dengan campuran 20
asam amino yang ditemukan pada protein yang satu diantaranya dilabel
(biasanya digunakan S32-metionin) molekul-molekul mRNA akan ditranslasi
menjadi campuran protein radioaktif yang dapat dipisahkan dengan elektroforesis
dan ditunjukkan dengan iiutodiograti (Gambal b). Tiap pita menunjukkan 1
protein yang dikodekan oleh salah satu molekul mRNA.
Gambar 6. Translasi babas sel
Analisa perbandingan DNA mitokondria pada jenis Gallus berbeda,
member gambaran perbedaan pada sekuen antara Gallus gallus seperti Gallus
sonnerati, Gallus varius clan Gallus lafayettei berturut-turut adalah 0,9%, 10,5%
clan 12,6%. Diasumsikan bahwa laju evolusi mtDNAnya adalah 3% per sejuta
tahun. Analisis mtDNA ini memberikan informasi tentang hubungan filogenik
maternal pada species Gallus (Munechika, et al. 1997). "
Mekanisme hormonan pada pengaturan ekspresi gen gel-gel mamalia
dipengaruhi oleh aktivitas cAMP, dimana c AMP berhubungan dengan pengaturan
sintesa enzim spesifik, seperti halnya pada bakteri. Mekanisme stimulasi sintesa
enzim spesifik seperti enzim steroid, hydrocortisone sama halnya dengan hormon
polipeptida seperti insulin. Perbedaan struktur dari hormon akan menunjukkan
mekanisme induksi enzim yang bebeda, seperti steroid yang diekspresi gennya
dimulai pada proses transkripsi dan insulin aktivitasnya dimulai pada tingkat post
transkripsi (Kenney, et al. 1973). Mekanisme regulasi dari lipoprotein lipase pada
© 2003 Digitized by USU digital library 8
tikut ditunjukkan pada tingkat translasi, namun tidak ada perubahan pada
mRNAnya (SafIari, et al. 1992).
Ekspresi gen untuk protein susu diatur oleh hormon growth factor dan
matriks ekstraselluler. Hormon prolaktin dan laktogen teraktifasi pada semua
tingkat. Ekspresi gen casein prolaktin meningkat pada tingkat transkripsi beta
casein gen dan stabil pada beta casein mRNA sedangkan hormon pertumbuhan
(somatotropin) pada alfa dan beta casein gen (Zwierzchowski, 1997).
Regulasi estrogen dan progesteron pada proses diferensiasi dan fungsional
dari oviduk ayam terfokus pada sintesa avolbumin. Mulai dari polipeptida tunggal
hingga 50% sampai 60% pada akhir diferensiasi. Proses yang dimulai dan
perubahan tekanan potensial untuk pemisahan elemen molekul yang
menyelubungi sintesa protein spesifik, termasuk polisom spesifik, rnRNA dan gen.
Langkah-langkah analisa regulasi antara transkripsi dan translasi pada mRNAs
spesifik seperti efek dari perkembangan dan variasi hormonal. Untuk lebih jelas
dapat dilihat pada gambar 7.
Gambar 7. Interaksi hormon pada perkembangan dan fungsi oviduk ayam
Skema efek estrogen dan progesteron pada perkembangan dan fungsional
oviduk ayam, terlihat estrogen (pada ayam muda) mengalami diferensiasi
sitoplasma gel-gel kelenjar tubular pada waktu sintesa ovalbumin, di sebut
stimulasi primer. Jika diferensiasi terhenti maka sintesa ovalbumin juga terhenti.
lni menunjukkan bahwa gel-gel dalam keadaan toidak aktif disebut stimulasi
sekunder. Hal ini akan aktif kembali bila pada ribosom estrogen dan progesteron
diproduksi. Namun sebaliknya dapat juga terjadi dimana terbentuknya
progesteron dan estrogen akan menghalangi diferensiasi sitoplasma dan akhirnya
akan menggagalkan sintesa ovalbumin pada permukaan gel tetapi masingmasing
gel tetap mengalami perubahan bentuk (Kenney, et al. 1973)
IV. PENUTUP
Hormon merupakan bahan kimia yang disekresikan ke dalam cairan tubuh
oleh satu sel atau sekelompok sel dan dapat mempengaruhi fisiologi sel-sel
tubuh. Hormon akan bekerja sesuai dengan reseptornya. Masing-masing reseptor
pada sel berbeda-beda, ada yang terdapat pada membran sel, sitoplasma dan inti
sel. Di dalam inti akan diekspresikan sesuai dengan cetakan gennya.
Gen merupakan sepotong DNA yang akan menyandikan rantai polipeptida
dan RNA. Tidak semua gen diekspresikan secara tepat dalam bentuk polipeptida.
Ekspresi gen oleh masing-masing hormon akan menunjukkan tahapan yang
berbeda, hal ini tergantung pada struktur hormon tersebut.
© 2003 Digitized by USU digital library 9
V. DAFTAR PUSTAKA
Brown, T.A. 1991. Gene cloning an introduction (pengaturan kloning gene) S.A.
Muhammad, dkk. Yayasan Essentia Medica. Yogyakarta
Glick, B.R. and J.J. Pasternale. 1994. Molecular Biotechnology Principles and
Aplication of Recombinant DNA. ASM Pres.
Guyton, A.C.1994. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. EGC.
Herrmann, K.M. and R.L. Somerville. 1983. Amino acid, Biosynthesis ang Genetic
Regulation. By Addison-Wessey Publishing Co. Inc.
Kenney, F; B.A. Hamkala; G.Favelulees and J.T. August. 1973. Gene Expression
and its Regulation. Plenum Press. New York.
Lehninger, A.L. 1994. Dasar-dasar Biokimia. Erlangga. Jakarta.
Mufarid, H. 1997. Beternak ayam hutan. Penebar Swadaya. Jakarta.
Munechika, I; H. Suzuki and S.Wakana. 1997. Cmperative Analysis of the
Restriction Endonuclease Cleavage Pattern of Mitochondrial DNA in the
Genus Gallus. Poultry Science. Japan.
Safrari, B; J.M. Ong and P.A. Ken. 1992. Regulation of Adipsa Lipoprotein Lipase
Gen Expression by Thyroid Hormone in Rats. Depart. Of Medicine.
Davision of Endocrinology. USA.
Wiryosuhanto, S.D. dan S. Sudardjat. D. 1992. Aplikasi Kesehatan Hewan. Hasil
Semiloka Biotehnologi Kesehatan Hewan. Direktorat Jenderal
Peternakan. Dep. Pertanian. Jakarta.
Wulangi. K.S. 1989. Prinsip-prinsip Fisiologi Hewan. Erlangga. Jakarta.
Zwierzchowski, L. 1997. Recent Date ons the regulation of expression of milk
Protein Genes. Proceding of the Conference Commemorating the 40 th
anniversary of the Institute of Genetics and Animal Breeding. Poland.